Изучение динамики концентраций факторов ангиогенеза на протяжении физиологической беременности

Яковлева Н.Ю., Васильева Е.Ю., Шелепова Е.С., Рябоконь Н.Р., Хазова Е.Л., Буравлева К.Р., Кузнецова Л.В., Зазерская И.Е.

ФГБУ Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова Минздрава России, Санкт-Петербург
Цель исследования. Определение концентрации сосудистого (VEGF) и плацентарного факторов роста (PlGF), растворимого рецептора-1 васкуло-эндотелиального фактора роста (sVEGF-R1) в сыворотке крови беременных женщин при физиологическом течении гестационного периода.
Материал и методы. Проведено когортное проспективное исследование 114 женщин с физиологически протекающей беременностью. Контроль факторов проводился в 11–13-ю, 22–24-ю, 32–34-ю недели гестации. Уровни VEGF, определялись методом иммуноферментного анализа, уровни PlGF и sVEGF-R1 – методом электрохемилюминисцентного иммунноанализа.
Результаты исследования. Отмечен рост концентрации PlGF с увеличением срока гестации. В 11–13 недель уровень PlGF составляет 51,9±7,2 пг/мл, в 32–34 недели — 481,3±27,3. Уровень VEGF увеличивается от I ко II триместру, снижается к 32–34-й неделям гестации. Концентрация sVEGF-R1 остается относительно стабильной в I (1991,6±30,7 пг/мл) и II (1980,7±27,7 пг/мл) триместрах. К 32–34-й неделям гестации отмечен рост показателя до 2266,5±51,3 пг/мл.
Заключение. Полученные результаты демонстрируют процесс физиологического ангиогенеза, а исследование, использованное в нашей описательной работе, следует рассмотреть как диагностическую процедуру при обследовании женщин из группы риска по развитию сосудистых осложнений.

Ключевые слова

Ключевые слов: ангиогенез
васкулогенез
плацентарный фактор роста
сосудистый фактор роста
антиангиогенный фактор

Физиологическое течение беременности во многом зависит от правильного развития плаценты. Значимым элементом адекватного развития плаценты является формирование полноценной сосудистой системы, которая напрямую зависит от «удачной» инвазии трофобласта, процессов васкулогенеза и ангиогенеза [1–3].

Вышеуказанные процессы происходят под контролем ангиогенных и антиангиогенных факторов, цитокинов, хемокинов, которых на сегодняшний день выделено более 50 [2, 3]. Наиболее значимыми из ангиогенных факторов являются белки группы сосудисто-эндотелиальных факторов, в частности сосудисто-эндотелиальный (Vascular Endothelial Growth Factor – VEGF или VEGF-А) и плацентарный фактор роста (Placental Growth Factor – PlGF), которые экспрессируются клетками трофобласта, плацентарными макрофагами, эндотелиальными клетками. Активность ангиогенных факторов регулируется антиангиогенным фактором – растворимым рецептором 1 васкуло-эндотелиального фактора роста (sVEGF-R1) [4–7].

В настоящее время большое количество научных работ посвящено определению концентраций и изучению действий биологически активных веществ на начальных сроках гестации [8–10]. Однако исследования, посвященные количественному определению ангиогенных и антиангиогенных факторов на протяжении беременности, единичны, их данные противоречивы [11–13].

Целью нашего исследования было определение концентрации VEGF, PlGF и sVEGF-R1 в сыворотке крови беременных женщин при физиологическом течении гестационного периода.

Материал и методы исследования

Настоящее исследование являлось когортным проспективным, выполнялось на базе ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России с 2013 по 2015 годы.

Под наблюдением находились 114 беременных женщин. У каждой женщины за беременность проводился забор крови из периферической вены в 11–13-ю, 22–24-ю, 32–34-ю недели гестации. Проводилась оценка соматического, акушерско-гинекологического анамнеза, клиническая и лабораторная оценка здоровья беременных женщин, течения беременности, родов, послеродового периода, показателей здоровья новорожденных.

На базе центральной клинико-диагностической лаборатории ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова проводилось измерение уровней биохимических факторов. Полученные пробы периферической крови центрифугировали со скоростью 2500 об./мин.

в течение 12 минут. Сепарированные образцы сыворотки хранили в пластиковых пробирках типа «Эппендорф» до тестирования при температуре -20°С не более 6 месяцев.

Концентрации VEGF определялись методом иммуноферментного анализа ручной планшетной методикой с помощью набора Human VEGF (Quantikine ELISA, R&D Systems); концентрации PlGF и sVEGF-R1 – методом электрохемилюминисцентного иммуноанализа с использованием наборов PlGF, sVEGF-R1 (Cobas RocheDiagnostics) на анализаторе Cobos E 411 Rochе.

Математическую обработку проводили с использованием программного пакета Statistica 10 (StatSoft Inc.).

Результаты исследования

В исследование включены 114 беременных женщин. 14 женщин (1,3%) исключены из исследования в связи с началом приема препаратов прогестерона, которые в свою очередь посредством иммунологического контроля могут влиять на выработку ростовых факторов [14]. По личным причинам 8 беременных женщин (7,0%) отказались от продолжения участия в исследовании, у 4 женщин (3,5%) произошел самопроизвольный выкидыш при сроке гестации 13,1±0,4 недели.

Критерии включения: срок гестации 11–13 недель, подписание информированного согласия для участия в исследовании. Критерии исключения: осложненное течение I триместра беременности, многоплодная беременность, соматические заболевания, прием кортикостероидов, нестероидных противовоспалительных средств, препаратов прогестерона.

Закончили исследование 88 беременных женщин: 54 (61,4%) первобеременных и 34 (38,6%) повторнобеременных повторнородящих. Средний возраст составлял 29,8±3,9 года. У повторнородящих при предыдущих родах осложнений не наблюдалось. При анализе течения беременности установлено, что уровень систолического артериального давления составил 115,2±7,3 мм рт. ст., диастолического – 75,2±3,1 мм рт. ст. Общая прибавка массы тела за беременности составила 11,3±0,4 кг и носила равномерный характер. Анемия легкой степени наблюдалась у 35 беременных (39,7%), средний уровень гемоглобина 103±5,2 г/л. На протяжении беременности у всех женщин показатели биохимического анализа крови, общего анализа мочи были в пределах референсных значений.

Оценка состояния плодов по данным ультразвукового, допплерометрического и кардиотокографического исследований в декретированные сроки патологии не выявила.

Роды произошли в срок гестации 39,2±1,4 недели, у 85 (96,6%) в головном и у 3 (3,4%) – в тазовом предлежании плода. Родоразрешены через естественные родовые пути 83 женщины (94,3%). Путем операции кесарева сечения родоразрешены 5 беременных (5,7%): в связи с начавшейся гипоксией плода – 3 пациентки, в связи с вторичной слабостью родовой деятельности – 2 пациентки. Средняя продолжительность родов составила 10,1±2,2 часа, безводный промежуток – 9,3±1,3 часа. Кровопотеря в родах была физиологическая – 235,0±31,3 мл (до 0,5% массы тела). Послеродовый период протекал без осложнений. Средняя масса тела новорожденных составила 3372,3±56,5 г, длина тела – 51,5±0,3 см, оценка по шкале Апгар – 7,8±0,1 балла. У всех детей наблюдалось физиологическое течение периода новорожденности.

При оценке содержания PlGF отмечен рост концентрации с увеличением срока гестации. При этом обращает на себя внимание семикратное увеличение показателя ко II триместру беременности. Так в 11–13 недель уровень PlGF составил 51,9±7,2 пг/мл, в 24–26 недель – 369,8±34,6 пг/мл (таблица). Выявленная динамика концентрации PlGF демонстрирует его активность в процессах морфологического развития сосудов плаценты на протяжении всего периода гестации.

При оценке динамики уровня VEGF пришли к следующему заключению. Отмечен постепенный рост уровня VEGF от I триместра (7,6±0,2 пг/мл) ко II триместру (8,2±0,2 пг/мл), с последующим снижением к 32–34 неделям гестации (5,3±0,9 пг/мл) (таблица), что, вероятно, связано с активным участием в процессах васкуло- и ангиогенеза в плацентарной ткани в I и II триместрах беременности и снижением активности к III триместру.

В то же время динамика антиангиогенного фактора показала отличительную тенденцию. При сроках гестации 11–13 и 24–26 недель показатели sVEGF-R1 остаются относительно стабильными. Так, в I триместре значение составляет 1991,6±30,7 пг/мл, во II триместре беременности – 1980,7±27,7 пг/мл.

Однако к 32–34 неделям гестации отмечен рост показателя на 14%, среднее значение которого составляет 2266,5±51,3 пг/мл (таблица), что связано с физиологическим созреванием плаценты, преобладанием антиангиогенных процессов.

Обсуждение

Важным элементом правильного развития плаценты является формирование адекватной сосудистой системы, обусловливающее физиологическое течение беременности и полноценное развитие плода. Вышеуказанные процессы начинаются с первых недель гестации сначала путем васкулогенеза, а затем путем ангиогенеза.

Сосудистая сеть плаценты пластична и изменяется в течение периода гестации. Этапы развития плаценты происходят под контролем множества сигнальных молекул, в частности ростовых факторов: VEGF, PlGF. Контроль действий за ними осуществляют ингибиторы – антиангиогенные факторы, в частности sVEGF-R1.

Установлено, что основной функцией VEGF является участие в пролиферации, дифференцировке, миграции, выживаемости эндотелиальных клеток [7, 15].

Научные данные свидетельствуют о ключевой роли PlGF в регуляции эффектов VEGF. Также PlGF стимулирует рост, миграцию и выживание эндотелиальных клеток [16], вызывает расширение кровеносных сосудов и стимулирует коллатеральный рост сосудов, активирует экспрессию макрофагами провоспалительных цитохемокинов [5, 17].

Активность VEGF и PlGF регулируется sVEGF-R1, который синтезируется плацентарными макрофагами и эндотелиальными клетками. Биологическая роль заключается в регуляции биодоступности ангиогенных факторов в сыворотке крови, путем их связывания для предотвращения избыточной инвазии клеток трофобласта, чрезмерного развития сосудистой сети плаценты [3, 5].

Изменение содержания сосудистых факторов в сыворотке крови женщин на протяжении беременности отражает изменение их содержания в маточно-плацентарном комплексе. В связи с этим измерение концентрации данных факторов в материнском кровотоке важно для изучения процессов развития и функционирования плаценты.

При проведении исследования были учтены и проанализированы данные литературы, касающиеся изучению динамики ангиогенных и антиангиогенных факторов на протяжении беременности.

Полученные показатели VEGF в I триместре беременности согласуются с данными исследования М.М. Зиганшиной и соавт. [13]. В исследовании И.С. Сидоровой, Н.А. Никитиной концентрации VEGF отличны от полученных данных в десятки раз, что можно связать с применением различных тест-систем [12].

Значения концентрации PlGF аналогичны с рядом авторов, сообщающих об увеличении концентрации до 34 недели гестации [11, 18, 19]. В то же время в ряде исследований отмечено увеличение концентрации PlGF от I ко II триместру, максимальные значения которого приходятся на 28–30 недель гестации [5, 9, 10]. По результатам проведенного нами исследования значения PlGF возрастают до 32–34 недель. Отличия можно связать с разными «точками» сравнения. Концентрации PlGF, полученные в работе J. Schiettecatte [20], разнятся с полученными данными: в I и II триместрах – достоверно ниже (р<0,05), в III триместре достоверно выше (р<0,01).

Полученная динамика значений sVEGF-R1 аналогична с данными ряда исследований [10, 11, 20].

Однако в работе И.С. Сидоровой [12] отмечен достоверный рост до 14 недель гестации, далее по мере прогрессирования беременности изменение концентрации было не достоверно и составляло 1798±52 пг/мл.

Выводы

  1. Проведенное исследование наглядно демонстрирует закономерность, отражающую максимальную концентрацию PlGF на сроке 32–34 недели, которая постепенно повышается начиная с I триместра.
  2. Концентрация VEGF незначительно повышается ко II триместру и заметно снижается к III триместру.
  3. sVEGF-R1 имеет обратно пропорциональную корреляцию с VEGF во II триместре и стремительно растет к 32–34 неделям.
  4. Полученные результаты демонстрируют процесс физиологического ангиогенеза, а исследование, использованное в нашей описательной работе, следует рассмотреть как диагностическую процедуру при обследовании женщин из группы риска по развитию сосудистых осложнений.

Список литературы

  1. Соколов Д.И. Васкулогенез и ангиогенез в развитии плаценты. Журнал акушерства и женских болезней. 2007; 56(3): 129-33.
  2. Ходжаева З.С., Мусиенко Е.В., Сухих Г.Т. Особенности секреции про- и антиангиогенных факторов в I триместре беременности у женщин с привычным выкидышем в анамнезе. Проблемы репродукции. 2011; 2: 30-4.
  3. Charnock-Jones D.S., Kaufmann P., Mayhew T.M. Aspects of human fetoplacental vasculogenesis and angiogenesis. Molecular regulation. Placenta. 2004; 25(2-3): 103-13.
  4. Бурлев В.А., Ильясова Н.А., Саркисов С.Э. Содержание ангиогенных факторов в крови у больных с эндометриальной гиперплазией. Проблемы репродукции. 2011; 6: 18-25.
  5. Andraweera P.H., Dekker. G.A., Roberts C.T. The vascular endothelial growth factor family in adverse pregnancy outcomes. Hum. Reprod. Update. 2012; 18(4): 436-57.
  6. Никитина Л.А., Демидова Е.И., Радзинский В.Е., Демидов Б.С., Самоходская Л.М. Роль матриксных белков, цитокинов и факторов ангиогенеза маточно-плацентарного комплекса в регуляции имплантации и плацентации. Акушерство и гинекология. 2007; 3: 5-10.
  7. Clark D.E., Smith S.K., He Y., Day K.A., Licence D.R., Corps A.N. et al. A vascular endothelial growth factor antagonist is produced by the human placenta and released into the maternal circulation. Biol. Reprod. 1998; 59(6): 1540-8.
  8. Koch S., Tugues S., Li X., Ponten A., Thoren P. Signal transduction by vascular endothelial growth factor receptors. Biochem. J. 2011; 437(2): 169-83.
  9. Levine R.J., Maynard S.E., Qian C., Lim K.H., England L.J., Yu K.F. et al. Circulating angiogenic factors and the risk of preeclampsia. N. Engl. J. Med. 2004; 350(7): 672-83.
  10. Verlohren S., Herraiz I., Lapair O., Schlembach D., Zeisler H., Calda P. et al. New gestational phase-specific cutoff values for the use of the soluble fms-like tyrosine kinase-1/placental growth factor ratio as a diagnostic test for preeclampsia. Hypertension. 2014; 63(2): 346-52.
  11. Palm М., Basu S., Larsson A., Wernroth L., A'Kerud H., Akelsson O. A longitudinal study of plasma levels of soluble fms-like tyrosine kinase 1 (sFlt1), placental growth factor (PlGF), sFlt1: PlGF ratio and vascular endothelial growth factor (VEGF-A) in normal pregnancy. Acta Obstet. Gynecol. Scand. 2011; 90(11): 1244-51.
  12. Сидорова И.С., Никитина Н.А. Особенности патогенеза эндотелиоза при преэклампсии. Акушерство и гинекология. 2015; 1: 72-8.
  13. Зиганшина М.М., Кречетова Л.В., Ванько Л.В., Ходжаева З.С., Мусиенко Е.В., Сухих Г.Т. Про- и антиангиогенные факторы в патогенезе ранних потерь беременности. Часть 1. Особенности содержания про- и антиангиогенных сывороточных факторов в ранние сроки беременности. Акушерство и гинекология. 2012; 3: 14-9.
  14. Johnson P.M., Christmas S.E., Vince G.S. Immunological aspects of implantation and implantation failure. Hum. Reprod. 1999; 14(Suppl.2): 26-36.
  15. Senger D.R., Galli S.J., Dvorak A.M., Perruzzi C.A., Harvey V.S., Dvorak H.F. Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid. Science. 1983; 219(4587): 983-5.
  16. Ziche M., Maglione D., Ribatti D., Morbidelli L. Placenta growth factor-1 is chemotactic, mitogenic and angiogenic. Lab. Invest. 1997; 76(4): 517-31.
  17. Yonekura H., Sakurai S., Liu X., Migita H., Wang H., Yamagishi S. et al. Placenta growth factor and vascular endothelial growth factor B and C expression in microvascular endothelial cells and pericytes. Implication in autocrine and paracrine regulation of angiogenesis. J. Biol. Chem. 1999; 274(49): 35172-8.
  18. Wikstrom A.K., Larsson A., Eriksson U.J., Nash P., Norden-Lindeberg S., Olovsson M. Placental growth factor and soluble FMS-like tyrosine kinase-1 in early-onset and late-onset preeclampsia. Obstet. Gynecol. 2007; 109(6): 1368-74.
  19. Taylor R.N., Grimwood J., Taylor R.S., McMaster M.T., Fisher S.J., North R.A. Longitudinal serum concentrations of placental growth factor: evidence for abnormal placental angiogenesis in pathologic pregnancies. Am. J. Obstet. Gynecol. 2003; 188(1): 177-82.
  20. Schiettecatte J., Russcher H., Anckaert E., Mees M., Leeser B., Tirelli A.S. et al. Multicenter evaluation of the first automated Elecsys sFlt-1 and PlGF assays in normal pregnancies and preeclampsia. Clin. Biochem. 2010; 43(9): 768-70.

Поступила 20.05.2016

Принята в печать 27.05.2016

Об авторах / Для корреспонденции

Яковлева Наталья Юрьевна, научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории физиологии и патологии беременности и родов ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России. Адрес: 197341, Россия, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, д. 2. Телефон: 8 (812) 702-68-54. E-mail: Natalis.1986@mail.ru
Васильева Елена Юрьевна, зав. центральной клинико-диагностической лабораторией ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России. Адрес: 197341, Россия, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, д. 2. Телефон: 8 (812) 702-68-54. E-mail: elena-almazlab@yandex.ru
Шелепова Екатерина Сергеевна, научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории репродукции и здоровья женщины ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России. Адрес: 197341, Россия, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, д. 2. Телефон: 8 (812) 702-68-54. E-mail: garbunchik@mail.ru
Рябоконь Никита Романович, ассистент кафедры акушерства и гинекологии ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России. Адрес: 197341, Россия, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, д. 2. Телефон: 8 (812) 702-68-54. E-mail: n-i-k-o-n@mail.ru
Хазова Елена Леонидовна, научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории репродукции и здоровья женщины ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России. Адрес: 197341, Россия, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, д. 2. Телефон: 8 (812) 702-68-54. E-mail: kamishi77@mail.ru
Буравлева Ксения Руслановна, клинический ординатор кафедры акушерства и гинекологии ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России. Адрес: 197341, Россия, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, д. 2. Телефон: 8 (812) 702-68-54. E-mail: k_senia91@mail.ru
Кузнецова Любовь Владимировна, к.м.н., доцент кафедры акушерства и гинекологии ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России. Адрес: 197341, Россия, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, д. 2. Телефон: 8 (812) 702-68-54. E-mail: krivo73@mail.ru
Зазерская Ирина Евгеньевна, д.м.н., зав. кафедрой акушерства и гинекологии ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России. Адрес: 197341, Россия, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, д. 2. Телефон: 8 (812) 702-68-54. E-mail: zazera@mail.ru

Для цитирования: Яковлева Н.Ю., Васильева Е.Ю., Шелепова Е.С., Рябоконь Н.Р., Хазова Е.Л., Буравлева К.Р., Кузнецова Л.В., Зазерская И.Е. Изучение динамики концентраций факторов ангиогенеза на протяжении физиологической беременности. Акушерство и гинекология. 2016; 8: 49-53.
http://dx.doi.org/10.18565/aig.2016.8.49-53

Также по теме

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.