Возможности применения преимплантационной генетической диагностики с целью повышения эффективности программ ЭКО/ИКСИ у супружеских пар с мужским фактором бесплодия и генетическими особенности у мужчин

Беляева Н.А., Калинина Е.А., Горшинова В.К., Зобова А.В., Глинкина Ж.И.

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва; Перинатальный медицинский центр «Мать и дитя», Москва, Россия
Цель исследования. Изучить частоту и структуру хромосомной патологии в эмбрионах у супружеских пар с мужским фактором бесплодия и мутацией AZF локуса хромосомы Y; провести сравнительную оценку эффективности программ вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) у данной группы пациентов при проведении преимплантационной генетической диагностикой (ПГД) и без нее.
Материал и методы. В проспективное клиническое исследование были включены 46 супружеских пар с мутацией AZF локуса хромосомы Y у мужчин и нормальными кариотипами супругов, нуждающихся в проведении программы ЭКО/ИКСИ. Основную группу составили 24 супружеские пары, которым был проведен 41 цикл ЭКО/ИКСИ с ПГД эмбрионов. Группу сравнения составили 22 супружеские пары, которым было проведено 39 циклов ЭКО/ИКСИ без ПГД. Преимплантационный генетический анализ проводился FISH методом (зонды фирмы Abbott к хромосомам X, Y, 13, 18, 21) на 3-й день культивирования эмбрионов. В основной группе для переноса в матку отбирались эмбрионы женского пола без патологии по исследованным хромосомам. Для статистического анализа данных в исследуемых группах применялись непараметрические методы (тест Манна–Уитни) и метод χ2.
Результаты. По результатам ПГД у супружеских пар с мутацией AZF локуса хромосомы Y уровень анеуплоидии в ядрах бластомеров эмбрионов составил 59,7%. Наиболее часто выявлялись анеуплоидии гоносом (43,4%) и патология по хромосоме 18 (32,1%). Сравнительный анализ исходов программ ЭКО/ИКСИ в исследуемых группах не выявил статистически значимых различий по показателям частоты имплантации, частоты наступления клинической беременности в расчете на цикл стимуляции и на перенос эмбрионов. Однако, частота репродуктивных потерь в группе без проведения ПГД была в 7 раз выше, чем с ПГД, и составила 88,9 против 12,5% (р=0,007). Частота живорождения в перерасчете на циклы с переносом эмбрионов была в 8 раз выше в группе с ПГД, чем без нее, и составила 22,6 и 2,9% соответственно (р=0,014).
Заключение. Супружеские пары с мужским фактором бесплодия и мутацией AZF локуса хромосомы Y составляют группу риска по невынашиванию беременности и рождению детей с хромосомной патологией, что требует индивидуализации стратегий лечения бесплодия у таких пациентов. С целью повышения эффективности программ ВРТ у данной группы пациентов целесообразно проведение преимплантационного генетического скрининга с анализом полного спектра хромосом у эмбрионов.

Ключевые слова

вспомогательные репродуктивные технологии
мужское бесплодие
анеуплоидии
преимплантационная диагностика

Проблема мужского бесплодия чрезвычайно актуальна и находится в фокусе прицельного изучения специалистами в области репродукции, генетики и андрологии. По различным данным на долю мужского фактора приходится примерно 40–50% случаев бесплодия [1–3].

Доказано, что среди причин выраженных нарушений репродуктивной функции у мужчин основополагающую роль играют различные генетические факторы – хромосомные нарушения, а также мутации отдельных генов, влияющих на мужскую репродуктивную систему [3–5].

Одна из главных генетических причин мужского бесплодия, сопряженного с тяжелыми формами нарушения сперматогенеза – делеции AZF локуса хромосомы Y. Распространенность данной мутации среди мужчин с выраженными отклонениями в показателях спермограммы варьирует в различных популяциях и в среднем составляет 10–15% [6–8].

Данные ряда исследований указывают на возможность вертикальной передачи мутаций AZF локуса хромосомы Y от отца сыну, что впоследствии может привести к нарушению репродуктивной функции у потомства [9, 10].

Кроме того, некоторые исследователи предполагают, что наличие микроделеции в AZF локусе хромосомы Y приводит к общей нестабильности этой хромосомы и впоследствии может явиться пусковым механизмом в возникновении анеуплоидии у эмбрионов (интерхромосомный эффект). Так в исследовании, проведенном E. Mateu с соавт. [11], FISH анализа ядер сперматозоидов мужчин с микроделецией AZF локуса хромосомы Y выявил высокий уровень не только дисомии половых хромосом и диплоидии, но и дисомии аутосом. Наличие в сперматозоидах пациентов с мутацией AZF локуса хромосомы Y высокого уровня анеуплоидии как гоносом, так и аутосом, может привести к возникновению хромосомных нарушений у эмбрионов этих пациентов.

В настоящее время в литературе данные относительно исходов программ ВРТ у супружеских пар с микроделецией AZF локуса хромосомы Y немногочисленны, представлены на малых выборках, освещены недостаточно полно и противоречивы [12–14].

Особое внимание исследователей уделяется изучению возможной взаимосвязи между наличием мутации AZF локуса хромосомы Y у мужчин и самопроизвольным прерыванием беременности у таких супружеских пар.

В литературе имеются сообщения о высокой распространенности микроделеций хромосомы Y среди пациентов с выкидышами у жен в анамнезе (16%) по сравнению с пациентами, имеющими детей, без отягощенного акушерского анамнеза (p<0,05). Таким образом, авторами высказывается предположение, что данная мутация может быть возможным этиологическим фактором спонтанного прерывания беременности [15]. С этими данными согласуются результаты других исследователей, показавших, что частота самопроизвольного прерывания беременности у супружеских пар с делецией AZF локуса хромосомы Y в программе ЭКО/ИКСИ составляет 30,8% [12].

Таким образом, супружеские пары с мужским фактором бесплодия и делецией AZF хромосомы Y у мужчин составляют особую группу пациентов. При проведении программы ВРТ у данной группы пациентов нельзя не учитывать особенности их генотипа.

Применение преимплантационной генетической диагностики (ПГД) с выбором для переноса в матку эмбрионов женского пола без генетической патологии может способствовать повышению эффективности программы ВРТ у данной категории пациентов.

Целью нашего исследования стало изучение частоты и структуры хромосомной патологии в эмбрионах у супружеских пар с мужским фактором бесплодия и мутацией AZF локуса хромосомы Y, а также проведение сравнительной оценки эффективности программ ВРТ у данной группы пациентов при проведении ПГД и без нее.

Материал и методы исследования

Были обследованы 439 супружеских пар с мужским фактором бесплодия, которые проходили лечение методом ЭКО/ИКСИ в рамках отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова Минздрава России (руководитель отделения д.м.н. Е.А. Калинина).

По результатам проведенного анализа для исследования были отобраны 46 супружеских пар с нормальными кариотипами супругов, патозооспермией и мутацией AZF локуса хромосомы Y у мужчин. Возраст женщин, включенных в исследование, был до 37 лет. У всех пациенток определяли нормальный овариальный резерв (визуализация по данным ультразвукового исследования не менее 5–7 антральных фолликулов в яичниках с каждой стороны, уровень антимюллерового гормона >1,1 нг/мл, ФСГ <8,0 МЕ/л [16]); не было выявлено отягощенного акушерско-гинекологического анамнеза (эндометриоз III–IV ст., миома матки больших размеров, СПКЯ и др.).

Все супружеские пары, включенные в исследование, были разделены на 2 группы в зависимости от вида программы ВРТ. Основную группу составили 24 супружеские пары, которым был проведен 41 цикл ЭКО/ИКСИ с ПГД эмбрионов. Группу сравнения составили 22 супружеские пары, которым было проведено 39 циклов ЭКО/ИКСИ без ПГД.

Стимуляция функции яичников проводилась по «длинному» протоколу с агонистами гонадотропин-рилизинг гормона и по протоколу с антагонистами гонадотропин-рилизинг гормона с индивидуальным подбором дозы гонадотропинов в зависимости от возраста пациентки и параметров овариального резерва. Культивирование эмбрионов осуществляли по стандартизированной методике.

ПГД проводилась FISH методом с применением зондов к хромосомам X, Y, 13, 18, 21 на 3-й день культивирования эмбрионов. Суммарно в основной группе было проанализировано 159 ядер бластомеров.

Статистическая обработка полученных данных выполнена с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows v. 7.0. Для сравнительного анализа данных в исследуемых группах применялись непараметрические методы (тест Краскела–Уоллиса) и метод χ2.

Результаты исследования и обсуждение

Анализ возрастных характеристик пациенток, включенных в исследование, не выявил статистически значимых различий между группами. Медиана возраста женщин в основной группе составила 30 лет (28–33 года), в группе сравнения – 29 лет (28–35 лет). Однако были выявлены значимые различия по возрасту мужчин – медиана этого показателя составила 34 года (22–56 лет) (p=0,001).

Пациентки исследуемых групп были сопоставимы по параметрам овариального резерва. Также не было выявлено статистически значимых различий в распространенности гинекологических и экстрагенитальных заболеваний между группами.

Анализ репродуктивной функции женщин выявил, что случаи первичного и вторичного бесплодия встречались с одинаковой частотой в исследуемых группах, при этом на долю первичного бесплодия приходилось примерно 80% случаев в каждой группе.

По параметрам фолликуло- и оогенеза, количеству полученных эмбрионов исследуемые группы были сопоставимы.

На первом этапе исследования в основной группе был проведен анализ 159 ядер бластомеров, полученных после биопсии эмбрионов на 3-и сутки культивирования. Результаты проведенной генетической диагностики у супружеских пар с мутацией AZF локуса хромосомы Y выявили высокий уровень анеуплоидии у эмбрионов, который составил 59,7%.

В структуре хромосомной патологии преобладала сочетанная анеуплоидия – 28,9%. Анализ данных по гоносомам и отдельным аутосомам выявил высокую частоту анеуплоидии гоносом и хромосомы 18 (табл. 1).

Следует отметить, что у значительной части эмбрионов в основной группе выявлялись анеуплоидии, при которых эмбрионы являются жизнеспособными и могут иметь высокий потенциал к имплантации и развитию, что может привести к рождению детей с генетической патологией. Частота встречаемости моносомии хромосомы Х и патологии гоносом, соответствующей синдрому Клайнфельтера, составила 11,3%, дисомии хромосомы Y – 8,8%. Частота трисомии хромосомы 13 составила 6,3%, хромосомы 18 – 14,5%, хромосомы 21 – 8,8% случаев.

Анализ связи между морфологическими характеристиками эмбрионов третьего дня развития и наличием у них анеуплоидии не выявил корреляции между этими показателями в группах с ПГД (р>0,05). Так, в основной группе у 66,2% эмбрионов «хорошего» качества была выявлена хромосомная патология, 46,3% эмбрионов «плохого» качества не имели патологии по исследованным хромосомам. Также не было выявлено корреляции между наличием анеуплоидии у эмбрионов и примененными протоколами стимуляции (р>0,05).

На заключительном этапе работы был проведен сравнительный анализ исходов программ ЭКО/ИКСИ в исследованных группах (табл. 2).

Показатели частоты имплантации были сопоставимы в исследуемых группах и составили 16% в основной группе и 14,7% в группе сравнения. Достаточно низкие показатели частоты имплантации у супружеских пар с делецией AZF локуса хромосомы Y в группе с ПГД могут быть связаны с наличием у эмбрионов анеуплоидии хромосом, анализ которых не производился в рамках ПГД.

Показатели частоты наступления беременности статистически значимо не различались у супружеских пар в исследуемых группах. Частота наступления беременности в расчете на перенос эмбрионов составила 25,8% в основной группе и 25,7% в группе сравнения.

Однако, частота репродуктивных потерь в группе без проведения ПГД была в 7 раз выше, чем с ПГД, и составила 88,9 против 12,5% (р=0,007), что может быть обусловлено наличием анеуплоидии у эмбрионов.

Частота живорождения у супружеских пар с мутацией AZF локуса хромосомы Y в перерасчете на циклы с переносом эмбрионов была в 8 раз выше в группе с ПГД, чем без нее, и составила 22,6 и 2,9% соответственно (р=0,014).

У супружеских пар в основной группе родилось 9 живых детей, в группе сравнения – 1 ребенок.

Заключение

Полученные в ходе проведения исследования данные свидетельствуют о том, что супружеские пары с мужским фактором бесплодия и мутацией AZF локуса хромосомы Y составляют группу риска по невынашиванию беременности и рождению детей с хромосомной патологией, что требует индивидуализации стратегий лечения бесплодия у таких пациентов. С целью повышения эффективности программ ВРТ у данной группы пациентов целесообразно проведение преимплантационного генетического скрининга с анализом полного спектра хромосом у эмбрионов.

Список литературы

1. Сухих Г.Т., Гамидов С.И., Попова А.Ю., Овчинников Р.И., Щербаков Д.В., Красова О.М., Ижбаев С.Х., Щеголев А.И., Дубова Е.А., Мишиева Н.Г., Абубакиров А.Н., Камалетдинов Н.С. Оптимизация подхода к решению проблемы бесплодного брака у мужчин с секреторной азооспермией. Терапевтический архив. 2013; 85(10): 70-5.

2. Божедомов В.А., Николаева М.А., Ушакова И.В., Спориш Е.А., Рохликов И.М., Липатова Н.А., Сухих Г.Т. Патогенез снижения фертильности при аутоиммунных реакциях против сперматозоидов. Акушерство и гинекология. 2012; 8-2: 64-9.

3. Poongothai J., Gopenath T.S., Manonayaki S. Genetics of human male infertility. Singapore Med. J. 2009; 50(4): 336-47.

4. Li L.L., Peng D., Wang R.X., Zhu H.B., Wang W.J., Liu R.Z. Correlation between chromosomal polymorphisms and male infertility in a Northeast Chinese population. Genet. Mol. Res. 2015; 14(4): 15435-43.

5. Xu J., Zhang A., Zhang Z., Wang P., Qian Y., He L. et al. DNA methylation levels of imprinted and nonimprinted genes DMRs associated with defective human spermatozoa. Andrologia. 2016; Jan. 25. doi: 10.1111/and.12535.

6. Yu X.W., Wei Z.T., Jiang Y.T., Zhang S.L. Y chromosome azoospermia factor region microdeletions and transmission characteristics in azoospermic and severe oligozoospermic patients. Int. J. Clin. Exp. Med. 2015; 8(9): 14634-46.

7. Zhang Y.S., Dai R.L., Wang R.X., Zhang H.G., Chen S., Liu R.Z. Analysis of Y chromosome microdeletion in 1738 infertile men from northeastern China. Urology. 2013; 82(3): 584-8.

8. Elfateh F., Rulin D., Xin Y., Linlin L., Haibo Z., Liu R.Z. Prevalence and patterns of Y chromosome microdeletion in infertile men with azoospermia and oligzoospermia in Northeast China. Iran J. Reprod. Med. 2014; 12(6): 383-8.

9. Dai R.L., Sun L.K., Yang X., Li L.L., Zhu H.B., Liu R.Z. Expansion and de novo occurrence of Y chromosome microdeletions occurring via natural vertical transmission in northeastern China. J. Int. Med. Res. 2012; 40(3): 1182-91.

10. Ferlin A., Arredi B., Speltra E., Cazzadore C., Selice R., Garolla A. et al. Molecular and clinical characterization of Y chromosome microdeletions in infertile men: a 10-year experience in Italy. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2007; 92(3): 762-70.

11. Mateu E., Rodrigo L., Martínez M.C., Peinado V., Milán M., Gil-Salom M. et al. Aneuploidies in embryos and spermatozoa from patients with Y chromosome microdeletions. Fertil. Steril. 2010; 94(7): 2874-7.

12. Patrat C., Bienvenu T., Janny L., Faure A.K., Fauque P., Aknin-Seifer I. et al. Clinical data and parenthood of 63 infertile and Y-microdeleted men. Fertil. Steril. 2010; 93(3): 822-32.

13. Kim M.J., Choi H.W., Park S.Y., Song I.O., Seo J.T., Lee H.S. Molecular and cytogenetic studies of 101 infertile men with microdeletions of Y chromosome in 1,306 infertile Korean men. J. Assist. Reprod. Genet. 2012; 29(6): 539-46.

14. Gambera L., Governini L., De Leo V., Luddi A., Morgante G., Tallis V., Piomboni P. Successful multiple pregnancy achieved after transfer of frozen embryos obtained via intracytoplasmic sperm injection with testicular sperm from an AZFc-deleted man. Fertil. Steril. 2010; 94(6): 2330. e1-3.

15. Karaer A., Karaer K., Ozaksit G., Ceylaner S., Percin E.F. Y-chromosome AZF regions microdeletions and recurrent pregnancy loss. Am. J. Obstet. Gynecol. 2008; 199(6): 662. e1-5.

16. Best Practices of ASRM and ESHRE. A joint meeting between the American Society for Reproductive Medicine and the European Society of Human Reproduction and Embryology. Cortina d’Ampezzo, Italy 1-3 March 2012.

Поступила 22.01.2016

Принята в печать 29.01.2016

Об авторах / Для корреспонденции

Беляева Надежда Анатольевна, к.м.н., научный сотрудник отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (965) 343-55-00. E-mail: dr_belyaeva@mail.ru
Калинина Елена Анатольевна, д.м.н., руководитель отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-26-22. E-mail: e_kalinina@oparina4.ru
Горшинова Виктория Константиновна, аспирант отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (926) 577-92-68. E-mail: chiasma@mail.ru
Зобова Анастасия Валерьевна, к.б.н., научный сотрудник отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (903) 000-29-38. E-mail: zoana2011@gmail.com
Глинкина Жанна Ивановна, д.б.н., заведующий лабораторией молекулярной генетики ПМЦ «Мать и дитя». Адрес: 117209, Россия, Москва, Севастопольский проспект, д. 24, корп. 1. Телефон: 8 (916) 609-60-12. E-mail: janna435@yandex.ru

Для цитирования: Беляева Н.А., Калинина Е.А., Горшинова В.К., Зобова А.В., Глинкина Ж.И. Возможности применения преимплантационной генетической диагностики с целью повышения эффективности программ ЭКО/ИКСИ у супружеских пар с мужским фактором бесплодия и генетическими особенности у мужчин. Акушерство и гинекология. 2016; 8: 107-111
http://dx.doi.org/10.18565/aig.2016.8.107-111

Также по теме

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.